028020 胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)(TSC)

　　(Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base) (Iron Sulfite Agar)

　　用 途：

　　用于食品和臨床樣本中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計數(shù)(SN0177-92，ISO標(biāo)準(zhǔn))。

　　原 理：

　　胰月示 、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子;葡萄糖和乳糖為可發(fā)酵糖類提供碳源;偏亞硫酸氫鈉和檸檬酸鐵銨用于檢測硫化氫的產(chǎn)生，使菌落中心呈黑色;卵黃含有卵磷脂，可檢測某些含卵磷脂酶的梭菌;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;D-環(huán)絲氨酸抑制非梭菌的細(xì)菌。

　　配方(每升)：

　　胰月 示 15g

　　大豆胨 5g

　　酵母膏粉 5g

　　偏亞硫酸氫鈉 1g

　　檸檬酸鐵銨 1g

　　瓊脂 15g

　　最終pH 7.6±0.2

　　使用方法：

　　1.稱取本品42g，加入蒸餾水或去離子水1000 mL ，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，每 瓶250 mL ，121℃高壓滅菌15 mL。

　　2.待TSC培養(yǎng)基冷至50℃左右，每100 mL培養(yǎng)基基礎(chǔ)加入配套試劑1支(SR0290)(D-環(huán)絲氨酸0.5mg)，(制作卵黃平板：加50%卵黃乳液10 mL到100 mL培養(yǎng)基中)，立即搖勻。

　　3.傾注TSC瓊脂到10個滅菌平皿中，每皿約5 mL，并迅速旋轉(zhuǎn)平皿，使瓊脂鋪平。當(dāng)瓊脂凝固后，將每個平皿編號標(biāo)記，以無菌操作，吸取稀釋樣品1 mL分別加到每個瓊脂平板表面中心。再向平皿中傾注TSC瓊脂15 mL，緩慢地旋轉(zhuǎn)平皿，使其與接種物混合均勻。(也可用L型玻璃棒，將0.1 mL樣品稀釋液均勻地涂布于含卵黃乳液的TSC瓊脂上，將平板水平靜置5—10 min使接種物被吸收。然后用不含卵黃的TSC瓊脂10mL覆蓋平板表層(含卵黃的TSC瓊脂最適于同時含有其他還原亞硫酸鹽梭狀芽孢桿菌的食品)。

　　4.瓊脂凝固后，將平板正置于厭氧罐內(nèi)，于36±1℃培養(yǎng)。不含卵黃的TSC瓊脂平板培養(yǎng)20h，含卵黃的TSC瓊脂平板培養(yǎng)24h。

　　5.取出平板用肉眼觀察生長情況和觀察有無黑色菌落。挑選生長有20—200個黑色菌落的平板，用菌落計數(shù)器將黑色菌落計數(shù)并半算每克食品中產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌數(shù)。產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌落在含 卵黃的培養(yǎng)基上呈黑色。并通常有2—4mm寬的白色沉淀環(huán)(卵磷脂酶作用的結(jié)果)。但有少數(shù)菌株的卵磷脂酶反應(yīng)較弱，或呈陰性。應(yīng)對所有懷疑為產(chǎn)氣莢膜梭菌的黑色菌落進(jìn)行計數(shù)，并做進(jìn)一步的證實試驗。

　　附：卵黃乳液：

　　用硬刷刷洗鮮蛋，瀝干，放70%乙醇中浸泡1h。以無菌操作取出蛋黃，加等體積無菌0.85%氯化鈉溶液，混合置4℃貯存。

　　質(zhì)量控制：

　　下列菌株接種于含卵黃的TSC瓊脂平板于36±1℃培養(yǎng)24 h結(jié)果如下：

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格：100g

　　參考文獻(xiàn)：

　　1.SN 0177-1992 中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗方法

　　2.ISO 7937：2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens-----Colony-count technique

　　3.SO 15213：2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions